Tecniche di Colorazione al Microscopio

I microscopi sono fondamentali nello studio e nell'osservazione di strutture molto piccole, come cellule e microrganismi. L'uso di coloranti per colorare selettivamente cellule e altri campioni ha reso l'uso dei microscopi molto più efficace. Le tecniche di colorazione microscopica includono la colorazione di cellule per immunofluorescenza, colorazione degli acidi nucleici e colorazione con calcofluor dei microsporidi.

Immunofluorescenza

Questa tecnica viene usata per colorare cellule per la microscopia a immunofluorescenza, utilizzata per studiare gli anticorpi, proteine speciali coinvolte nelle reazioni di difesa dell'organismo. Prima i tecnici trattano i campioni cellulari con una soluzione di metanolo e li lavano con una soluzione di fosfato tamponato salino, secondo The Science Advisory Board. Aggiungono anticorpi animali alle cellule. Poi aggiungono PPD, una miscela di proteine chiamate antigeni, e la soluzione Tris che controlla l'acidità. Gli anticorpi si legano agli antigeni per inattivarli. Sotto la luce di un microscopio a fluorescenza, queste molecole legate sono le uniche che appaiono in colore fluorescente.

Colorazione degli Acidi Nucleici

Il DNA è un acido nucleico nelle cellule. Alcuni coloranti possono reagire con esso, causando colorazione differenziale. Secondo The Journal of Histochemistry & Cytochemistry, i coloranti commerciali TOTO-3 e TO-PRO-3 colorano il DNA in rosso sotto un microscopio a fluorescenza, mentre i coloranti SYBR Green I e YO-PRO-1 lo colorano in verde. Questo metodo è spesso usato in campioni di tessuto congelato di animali.

Colorazione con Calcofluor

La colorazione con calcofluor viene usata per identificare batteri e microsporidi, un tipo di parassita spesso correlato a infezioni intestinali. Secondo il Journal of Clinical Microbiology, il colorante calcofluor viene mescolato con soda caustica e conservato al buio.

I tester aggiungono alcune gocce di questa soluzione a campioni di feci contaminate. Successivamente aggiungono il colorante Evans Blue allo 0,5%. Esaminano i campioni sotto un microscopio a fluorescenza. I microsporidi diventano fluorescenti.