Come Usare un Microscopio Invertito a Fluorescenza
Il microscopio è standard in laboratorio e ingrandisce cose troppo piccole per l'occhio. Nei laboratori professionali si esaminano cristalli microscopici, chip, cellule, tessuti e microrganismi interi. L'abbondanza di microscopi avanzati, come i confocali a scansione laser, ha reso la tecnica microscopia impegnativa. I microscopi invertiti a fluorescenza sono costosi e richiedono manutenzione estesa e abilità operative. Per questo è raro trovarli fuori dall'industria scientifica professionale.
Cosa Serve
- Campioni
- Vetrini per microscopio
- Microscopio invertito con tutti i filtri fluorescenti
Istruzioni
Familiarizzare con tutti i termini scientifici usati in microscopia e imaging a fluorescenza. Se non si ha familiarità con microscopia avanzata, fluorescenza e terminologia scientifica, è imperativo cercare tutorial o corsi formali. Inoltre, bisogna conoscere i componenti del microscopio. La microscopia a fluorescenza invertita è completamente inadatta a principianti o profani.
Accendere l'alimentazione alla sorgente luminosa a campo chiaro, la camera e la sorgente UV per successiva rilevazione segnale fluorescente. Posizionare un filtro bloccante o scuro per schermare la luce UV finché non pronta per l'imaging fluorescente.
Posizionare il vetrino con campione sullo stage e fissarlo con i perni porta-vetrino. Impostare il condensatore su "Campo-Chiaro" per campioni colorati o istologici visibili in luce bianca o "Contrasto di Fase" per non colorati. Cercare il campione usando l'oculare.
Per ridurre l'intensità della luce a campo chiaro, inserire o cambiare a filtri a densità neutra forniti. Regolare all'intensità appropriata. Regolare l'ingrandimento ruotando lentamente le manopole di regolazione fine e grossolana finché la risoluzione non è fine e chiara. Non deve esserci scolorimento o anomalie da raggi rifratti.
Accendere la camera (nei più microscopi non c'è altro modo che avviare il software) per il software di acquisizione e analisi immagini installato dal produttore sul computer collegato. Impostare parametri per scala, ingrandimento, obiettivi, ecc. Impostare software su "Live Imaging" in "Campo-Chiaro".
Quando il campione è pronto, spegnere la sorgente luminosa e accendere la sorgente fluorescente (UV). Di nuovo, regolare l'intensità UV per alzare o abbassare il segnale fluorescente dal campione.
Quando il campione è pronto per essere fotografato, passare il software da "Live Imaging" a "Acquisizione Immagine". Impostare apertura, tempo esposizione, fuoco e altri parametri richiesti. Notare che l'immagine osservata via oculare non sarà la stessa acquisita dalla camera e vista sul software. Regolazioni estensive a parametri come fuoco e intensità fluorescenza saranno sempre necessarie.